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實時熒光定量PCR儀的操作步驟是什么

更新時間:2025-10-30      點擊次數:827
實時熒光定量pcr儀是用于熒光測量的儀器,采用側邊熒光采集方式,6個熒光通道同時采集,5S內可完成96個樣本6個熒光通道的檢測,大大節約檢測時間。本產品具有強大的軟件及硬件功能,滿足多場景客戶使用需求。
產品特點:
熒光信號強、背景噪聲低,靈敏度高。
5S內完成96個樣本所有熒光通道的檢測。
采用LED光源設計,節能環保,使用壽命長,免維護。
自動出倉功能,可與自動化工作站配合使用,工作效率高。
PC端操作,一臺電腦可控制多臺儀器,可隨時運行多組實驗。
軟件分析功能強大,可以進行定性/定量分析、HRM、基因分型等。
實驗前準備:
‌耗材選擇‌:根據儀器型號選擇適配的八連管、96孔板或384孔板,需提前確認儀器配置‌。
‌試劑準備‌:將qPCR預混液、模板DNA、引物、無酶水等試劑置于冰盒上,并放入生物安全柜中‌。
‌儀器檢查‌:開機后輸入密碼,待自檢完成(指示燈變綠)后啟動軟件‌。
反應體系配置:
‌混合試劑‌:按說明書計算用量,將預混液、無酶水、引物加入Ep管中,顛倒混勻‌。
‌加樣‌:將混合液加入八連管左側兩列,模板加入右側,每種濃度設兩個平行‌。
‌離心‌:蓋緊管蓋后瞬時離心,確保溶液混合均勻‌。
儀器上機操作:
‌裝載樣本‌:彈出儀器托架,將八連管或96孔板放入(八連管需適配器),注意對稱平衡放置‌。
‌設置程序‌:
選擇實驗類型(如SYBR Green)‌。
設置溫度程序(如預變性95℃ 30s,擴增階段95℃ 5s、60℃ 30s,循環40次)‌。
確認熱蓋溫度、反應體系體積(如20μL)‌。
‌啟動運行‌:保存程序后開始實驗,過程中勿拉動反應艙‌。
結果分析:
‌數據采集‌:程序結束后自動生成擴增曲線和熔解曲線,需檢查曲線是否平滑、復孔結果是否均一‌。
‌閾值調整‌:若為定性實驗(如病毒檢測),需設置陰性/陽性對照,并手動調整閾值以提高準確性‌。
 
 
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